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標(biāo)本對(duì)ELISA試劑盒檢測(cè)的影響說(shuō)明
點(diǎn)擊次數(shù):1220 更新時(shí)間:2021-07-21


ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。 由于ELISA方法靈敏

,特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備,所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因

素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外,有時(shí)??梢姷揭恍╁e(cuò)

誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性);本司在這里為大家解讀下ELISA試劑盒檢測(cè)的影響因素中標(biāo)本

的影響。


  1.  溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性。可能是溶血血清中含有過(guò)

氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過(guò)程中往往難以*洗脫,它可使

H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍(lán)色,

產(chǎn)生假陽(yáng)性[2]。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。


   2. 標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同

溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。


  3.  標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、造成

假陽(yáng)性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測(cè)定,5 d

內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白

質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。


   4. 塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。

好使用真空采血管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3

)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性。


   5. 標(biāo)本凝固不全。 在工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)

行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見的

纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結(jié)果;因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。



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