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以下五個問題 讓你更了解蛋白檢測
點擊次數(shù):732 更新時間:2019-08-15
  問題一:可以提供哪幾類蛋白樣品?
  解答:待檢測的蛋白樣品可以是蛋白溶液、蛋白凍干粉或直接切膠的濕膠塊。對于Western Blotting,在PVDF膜上的蛋白樣品,是無法回收進行試驗的。
  問題二:蛋白樣品如何保存適宜?
  解答:蛋白樣品不要像平時試驗一樣,放在緩沖溶液中保存,因為不同的緩沖液體系中的無機鹽成份,會嚴重干擾蛋白檢測結(jié)果。如切膠后的膠條直接放在EP管中,低溫保存即可。
  問題三:如何避免待檢測蛋白的二次污染問題?
  解答:很多客戶抱怨蛋白純度無法達到要求,檢測結(jié)果不理想,并且會出現(xiàn)莫名其妙的角蛋白峰。這是典型的實驗過程中二次污染,這種二次污染源就是我們的實驗習慣。蛋白質(zhì)譜檢測中的角蛋白峰主要在染膠、脫色、切膠和酶解過程中引入的,其來源包括我們的皮膚屑,頭皮屑,衣物上的動植物蛋白等,因此在試驗關(guān)鍵操作過程中,如切膠一定要身穿實驗服,佩戴手套,口罩和發(fā)套在通風櫥中進行;洗染膠的容器也需要使用70%的酒精清洗,再使用去離子水沖洗,實驗過程專心致志,做到快速、準確。
  問題四:蛋白濃度偏低,如何濃縮?
  解答:可以使用超濾法濃縮,對蛋白性質(zhì)不會有改變,蛋白種類也不容易丟失,但是損耗比較大,甘油和去垢劑等會堵塞濾膜,影響效果;也可以使用凍干法,對樣品進行低溫冷凍干燥濃縮;常見的還有沉淀法,該方法容易操作并且方便快捷,但是可能會有部分種類的蛋白無法沉淀導致蛋白種類丟失。
  問題五:提供多少蛋白質(zhì)才能滿足實驗要求?
  解答:正常情況下,使用考馬斯亮藍染色能夠看見的點,就有機會鑒定出來,將蛋白質(zhì)收集后郵寄給鐘鼎生物即可,不同的檢測項目,對蛋白質(zhì)的需要量是不同的,但是為了便于我們操作,請?zhí)峁┳懔康牡鞍?,盡量保證濃度大于1mg/ml,蛋白純度大于90%,在條件允許情況下蛋白質(zhì)的量越多越好,單項檢測少不得低于5ug。
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